UPLCMSMS同时测定8种B族维生素的含量[范文]

第一章前言 

1.1 B族维生素的研究概况

B族维生素属于水溶性维生素，在人体的生长发育、免疫系统、日常保健、视觉、皮肤健康、红细胞生长、神经系统均有着十分重要的作用，主要由维生素B1（盐酸硫胺素, thiamine hydrochloride）、维生素B2（核黄素, riboflavin）、维生素B3（烟酰胺, niacinamide）、维生素B5（泛酸钙, calcium pantothenic）、维生素B6（吡哆醇, pyridoxine）、维生素B7（生物素, biotin）、维生素B9（叶酸, folic acid）、维生素B12（钴胺素, cyanocobalamin）组成，它们的化学结构如图1-1所示。

Figure 2-1 The mass spectrum of the eight analysts

（A: VB1; B: VB3; C:VB6; D:VB9; E:VB2; F:VB5; G:VB7; H:VB12)

1.2 B族维生素的液质联用分析研究概况

由于B族维生素是微量物质，又是体内的内源性物质，故到目前为止，关于HPLC-MS法测定B族维生素的报道有很多，但主要用于食品和体内样品的测定，而用于药品和保健品测定的LC-MS方法报道较少。

Huang M等采用LC-MS/MS法同时测定了牛奶中VB1、VB2、VB3和VB6的含量。采用加入5 mol·L-1盐酸的前处理方法，用同位素内标法进行校正。结果显示，样品前处理加入5 mol·L-1盐酸不仅能保持VB1良好的稳定性，且质谱响应高于其它前处理试剂，方法的回收率为100%±6%，但所测定的成分较少。

REN X N等采用LC-MS/MS法同时测定了牛奶中VB1、VB2、FAD、FMN、烟酸、烟酰胺、VB5、吡哆醇、吡哆醛和吡哆酸的含量，前处理方法为加入甲醇沉淀蛋白后，用乙酸乙酯进行萃取；采用甲酸铵溶液与乙腈进行梯度洗脱，并利用同位素内标法进行校正。质谱条件采用ESI源，正离子检测模式。所建立的分析方法中所有待测成分的提取回收率在80.1-120.2%之间，准确度在98.3%-108.0%之间，其日内日间精密度均小于20%，该方法最大的优点灵敏度较高，测定成分较多。

Zheng X H等采用LC-MS/MS法同时测定了人体血浆中叶酸和其活性形式5-甲基-4-氢叶酸的含量，并将所建立的LC-MS/MS方法用于体内药动学研究。前处理方法采用甲醇沉淀蛋白后，莫索尼定作为内标物，进行分析。色谱条件采用1 mmol/L的乙酸铵（含0.6%甲酸）与乙腈进行梯度洗脱，质谱条件采用ESI正离子模式进行检测。

第二章实验与结果

        2.1仪器与试药

        2.1.1仪器

2.2实验方法与结果

2.2.1 溶液的配制

2.2.1.1混合对照品储备液的配制

在避光条件下取VB1对照品22.48 mg、VB7对照品2.57 mg、VB12对照品1.93 mg，精密称定，分别置25 ml，10 ml和100 ml棕色容量瓶中，加入适量0.3% NH3·H2O溶液超声溶解，放冷，并用0.3% NH3·H2O稀释至刻度，作为VB1、VB7、VB12对照品储备液。

取VB2对照品11.30 mg、VB3对照品82.71 mg、VB5对照品35.07 mg、VB6对照品11.80 mg、VB9对照品1.78 mg，精密称定，转移至100 ml棕色量瓶中。精密量取VB1对照品储备液12.5 ml、VB7对照品储备液1.0 ml、VB12对照品储备液1.0 ml置该100 ml棕色量瓶中，加入约60 ml的0.3%NH3·H2O超声至溶解后，放冷，用0.3%NH3·H2O稀释至刻度，摇匀，配制成分别含有VB1 112.4 μg·mL-1、VB2 113.0 μg·mL-1、VB3 827.1 μg·mL-1、VB5 350.7 μg·mL-1、VB6 118.0 μg·mL-1、VB7 2.570 μg·mL-1、VB9 15.97 μg·mL-1、VB12 184.3 ng·mL-1的混合对照品储备液，避光备用。

2.2.1.2供试品溶液的配制

在避光条件下取复合B族维生素片（D-1）10片，精密称定，研细。取片粉约0.5 g，精密称定，置50 ml棕色量瓶中，加入约0.3%NH3·H2O 40 mL。超声处理（功率200 W，频率40 kHz）30 min，放冷，用0.3%NH3·H2O稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，避光备用。

2.2.2 色谱条件与质谱条件

2.2.2.1色谱条件

色谱柱：Waters BEH C18柱（50 mm×2.1 mm, 1.7 μm）；流动相：0.2%甲酸(A)-乙腈(B);梯度洗脱：0~2 min 0.5~0.5% B，2~7 min 0.5~18.0% B，7~7.5 min 18.0~18.0% B，7.5~8 min 18~0.5% B，8~10 min 0.5~0.5% B；流速：0.2 mL·min-1；柱温：30℃；进样量：10 μl。

2.2.2.2质谱条件

离子源：电喷雾离子源（ESI）；毛细管电压:3.5 kv；脱溶剂气温度：350 ℃；离子源温度：120 ℃；脱溶剂气流速：600 L/hr；碰撞气：50 L/hr；质谱扫描方式：多反应离子监测（MRM）

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